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以下这些Waters液相色谱柱的选择方法你一定要记住
发布时间:2019-12-26   点击次数:745次
   Waters液相色谱柱的选择方法概述:
 
  1、填料的种类:
  填料的基质一般选择使用多孔硅胶或聚合物等,在细孔的表面有多种经过化学修饰的官能团。
  利用目标成分疏水性的不同起到分离效果的反相分离模式,利用极性不同进行分离的正相分离模式,根据分子大小的不同而分离的尺寸排阻模式,根据离子性质的不同而达到分离的离子交换模式,又或者分离光学异构体等,根据目的的不同,需要选择对应的填料。
  作为填充剂的代表十八烷基、辛基、丁基等即在硅胶的细孔表面化学键合的C18(ODS)、C8或C4等,碳链越长,疏水性越强。
 
  2、填料孔径:
  多孔硅胶为基体的填料表面具有无数的细孔,需要根据目的成分的分子量选择对应大小的填料孔径。微孔径100?(10nm)对应5000左右的分子量。分子量大于5000的,可以选择300?(30nm)或以上的大孔径柱子。目的成分能够进入孔的话,才能与官能团相互作用从而起到分离的效果。对于大分子蛋白质或聚合物等高分子,如果不是大孔径的基体,与官能团的相互作用就会减少。另外,分析低分子时,选择太大的微孔,由于会扩散故导致峰型可能会展宽。
 
  3、Waters液相色谱柱尺寸(内径):
  一般通用的HPLC柱内径为4.6mm,LC/MS内径多为2.1mm,毛细管HPLC色谱柱为不满1mm,制备HPLC色谱柱6.0mm以上。通用HPLC系列,内径不同得到的结果也不同。即使改变内径,根据色谱柱的截面积比改变相应的流速,保留时间基本不会改变。特别是对于像UV、RI一样对于浓度要求很高的检测器而言,流速越小,其对应的灵敏度也越高。需要注意的是,通用型HPLC色谱柱内径太小,装置的死体积影响变大,峰型会变宽。并且根据HPLC系统使用目的的不同种类也不同,能够设定的正确的流速与流速范围,系统响应等也会不同,所以根据系统不同选择对应的内径是十分重要的。
 
  4、Waters液相色谱柱尺寸(长度):
  一般使用较多的色谱柱的长度,通用型,制备HPLC柱长度为150~250mm,LC/MS为100-150mm,超快速HPLC(UHPLC)为50-100mm。Waters液相色谱柱长度越长理论塔板数也越高。只是,需要注意,色谱柱长度加倍后,分析时间与使用压力也会加倍。对于2μm或者3μm的微粒子,分离度和理论塔板数都较好时,将色谱柱的长度变短,可以缩短分析时间,进行快速分析。
 
  5、接头形式:
  Waters液相色谱柱的接头根据厂家的不同也会有不同。一般分析色谱柱是1/16英寸外径的管子使用螺丝进行连接,若连接不同的接口,较易产生死体积与漏液现象。
  特别对于不锈钢的配管等,需用套圈固定管子,就必须选择对应的接口形式。
  接口形式和螺距有英寸螺距和毫米螺距两种。一般Waters接口型使用比较普遍。无论是HPLC或UHPLC,通过选择适当的色谱柱接口形式,InertSustain以及Inertsil的性能能够充分的发挥。
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